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技術(shù)文章 / article
細胞培養(yǎng)中由血清引起的細胞生長不佳及病毒滴度的影響
2017-08-15 瀏覽次數(shù)：1748
血清是一種成分復(fù)雜的混合物，不同批次血清對細胞生長的促進作用不同。大規(guī)模細胞培養(yǎng)中由血清引起的細胞生長狀態(tài)不佳及病毒滴度的影響表現(xiàn)在以下幾個方面：
1、細胞長的很好，致密的單層，狀態(tài)也很正常，但是接毒后細胞基本不發(fā)生病變，做滴度檢測幾乎測不出抗原滴度。這種情況也許是因為血清中含有與接種的病毒有同源的特異性抗體。比如血清中經(jīng)常會存在乙腦抗體，牛腹瀉病毒抗體等，如果存在這些抗體，就會把接進去的病毒給中和掉。如果抗體滴度很高，病毒會被抗體*中和，就沒有病毒顆粒在細胞中增殖，所以會檢測不到病毒滴度。這種情況給疫苗企業(yè)造成的損失是相當(dāng)大的，不產(chǎn)毒等于前面所做的那么多工作全部白費，浪費人力、物力，尤其是時間上的浪費，從培養(yǎng)細胞開始到接病毒，到收液至少需要一兩個月，一旦出現(xiàn)不產(chǎn)毒的情況，那么這一兩月時間就白白浪費掉了，這也是牛血清給疫苗企業(yè)造成的風(fēng)險之一。
2、細胞傳幾代后就出現(xiàn)脫壁現(xiàn)象，不能連續(xù)傳代 ；質(zhì)量較差的血清缺乏某種細胞的貼壁因子，會使細胞在傳代過程中逐漸喪失貼壁的能力。細胞會從正常的貼壁狀態(tài)，邊緣開始萎縮，上翹。觀察到的現(xiàn)象就是細胞表面不光滑，晃動細胞瓶會看到細胞表面有絮狀物隨培養(yǎng)液波動。隨著傳代次數(shù)增加，細胞萎縮的情況越來越嚴重，直到zui終*脫壁而死亡。
3、細胞傳代后形態(tài)不正常，細胞狀態(tài)發(fā)生變化 ；由于血清的質(zhì)量問題，使原本狀態(tài)正常的細胞經(jīng)傳代后形態(tài)會變差；比如：細胞瓶里會出現(xiàn)一些蠕動的小黑點（并非污染），或者細胞表面形成一層油狀覆蓋物；細胞的輪廓變得模糊，細胞之間的間隙被血清中的蛋白顆粒填充，從而影響細胞向四周擴展生長。
4、細胞生長速度緩慢，長滿單層時間長；從同一細胞瓶中分出兩瓶細胞，用同一種培養(yǎng)液，分別加入10％的對照血清和待檢血清，在相同條件下培養(yǎng)72小時，會出現(xiàn)對照血清長滿單層，而待檢血清大約只有60～70％，這種血清就不適合用來大規(guī)模培養(yǎng)細胞。
5、細胞生長的狀態(tài)一般，產(chǎn)毒少，毒價低。這種情況比較常見，細胞是病毒的載體，由于血清質(zhì)量不好，導(dǎo)致細胞生長狀態(tài)不好，病毒就無法進行正常的復(fù)制。并非所有病毒都不能復(fù)制，所以就造成疫苗的效價不夠，可能造成不合格產(chǎn)品。
1、細胞長的很好，致密的單層，狀態(tài)也很正常，但是接毒后細胞基本不發(fā)生病變，做滴度檢測幾乎測不出抗原滴度。這種情況也許是因為血清中含有與接種的病毒有同源的特異性抗體。比如血清中經(jīng)常會存在乙腦抗體，牛腹瀉病毒抗體等，如果存在這些抗體，就會把接進去的病毒給中和掉。如果抗體滴度很高，病毒會被抗體*中和，就沒有病毒顆粒在細胞中增殖，所以會檢測不到病毒滴度。這種情況給疫苗企業(yè)造成的損失是相當(dāng)大的，不產(chǎn)毒等于前面所做的那么多工作全部白費，浪費人力、物力，尤其是時間上的浪費，從培養(yǎng)細胞開始到接病毒，到收液至少需要一兩個月，一旦出現(xiàn)不產(chǎn)毒的情況，那么這一兩月時間就白白浪費掉了，這也是牛血清給疫苗企業(yè)造成的風(fēng)險之一。
2、細胞傳幾代后就出現(xiàn)脫壁現(xiàn)象，不能連續(xù)傳代 ；質(zhì)量較差的血清缺乏某種細胞的貼壁因子，會使細胞在傳代過程中逐漸喪失貼壁的能力。細胞會從正常的貼壁狀態(tài)，邊緣開始萎縮，上翹。觀察到的現(xiàn)象就是細胞表面不光滑，晃動細胞瓶會看到細胞表面有絮狀物隨培養(yǎng)液波動。隨著傳代次數(shù)增加，細胞萎縮的情況越來越嚴重，直到zui終*脫壁而死亡。
3、細胞傳代后形態(tài)不正常，細胞狀態(tài)發(fā)生變化 ；由于血清的質(zhì)量問題，使原本狀態(tài)正常的細胞經(jīng)傳代后形態(tài)會變差；比如：細胞瓶里會出現(xiàn)一些蠕動的小黑點（并非污染），或者細胞表面形成一層油狀覆蓋物；細胞的輪廓變得模糊，細胞之間的間隙被血清中的蛋白顆粒填充，從而影響細胞向四周擴展生長。
4、細胞生長速度緩慢，長滿單層時間長；從同一細胞瓶中分出兩瓶細胞，用同一種培養(yǎng)液，分別加入10％的對照血清和待檢血清，在相同條件下培養(yǎng)72小時，會出現(xiàn)對照血清長滿單層，而待檢血清大約只有60～70％，這種血清就不適合用來大規(guī)模培養(yǎng)細胞。
5、細胞生長的狀態(tài)一般，產(chǎn)毒少，毒價低。這種情況比較常見，細胞是病毒的載體，由于血清質(zhì)量不好，導(dǎo)致細胞生長狀態(tài)不好，病毒就無法進行正常的復(fù)制。并非所有病毒都不能復(fù)制，所以就造成疫苗的效價不夠，可能造成不合格產(chǎn)品。
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