原代細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的一些錯(cuò)誤

原代細(xì)胞（primary culture cell）是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。原代細(xì)胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究，如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學(xué)研究等，還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門(mén)的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。

原代細(xì)胞如何進(jìn)行培養(yǎng)？

常用的原代細(xì)胞培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng)。

分散細(xì)胞培養(yǎng)大致步驟為：將動(dòng)物組織從機(jī)體中取出離散成單個(gè)細(xì)胞（常用胰蛋白酶），置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞 得以生存、生長(zhǎng)和繁殖（注意整個(gè)過(guò)程無(wú)菌）。

組織塊培養(yǎng)是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上，加入培養(yǎng)基后進(jìn)行培養(yǎng)。

原代細(xì)胞培養(yǎng)中的常見(jiàn)錯(cuò)誤及正確操作方法？

錯(cuò)誤＃1：一小管原代細(xì)胞在水浴中解凍一段時(shí)間

糾正＃1：原代細(xì)胞對(duì)解凍過(guò)程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴中，保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶，并轉(zhuǎn)移到無(wú)菌操作臺(tái)。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準(zhǔn)備就緒，以便可以立即用于接種細(xì)胞，并置于培養(yǎng)箱中。

錯(cuò)誤＃2：解凍小瓶后直接離心原代細(xì)胞

糾正＃2：我們不建議在解凍后離心細(xì)胞，因?yàn)殡x心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住，在恢復(fù)原代細(xì)胞后的第二天更換培養(yǎng)基以去除任何殘留的DMSO。

錯(cuò)誤＃3：允許原代細(xì)胞變得過(guò)于融合

糾正＃3：當(dāng)生長(zhǎng)至100％匯合時(shí)，原代細(xì)胞可以變得衰老。記住，原代細(xì)胞不是100％純，因此重要的是盡量減少污染細(xì)胞的生長(zhǎng)。我們建議在細(xì)胞達(dá)到90-95％融合時(shí)，對(duì)原代細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

錯(cuò)誤＃4：傳代原代細(xì)胞時(shí)過(guò)度胰蛋白酶消化

糾正＃4：當(dāng)細(xì)胞傳代時(shí)，使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后*中和細(xì)胞中的胰酶，因?yàn)槿魏位钚缘囊鹊鞍酌付紝p傷細(xì)胞。推薦專(zhuān)門(mén)為原代細(xì)胞配制的胰蛋白酶中和溶液，但也可以使用10％血清或大豆胰蛋白酶抑制劑。

錯(cuò)誤＃5：原代細(xì)胞可以很容易地重新凍存

糾正＃5：通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞，因?yàn)檫@可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓Ｔ?xì)胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。

錯(cuò)誤＃6：原代細(xì)胞可以無(wú)限的增殖

糾正＃6：與細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞具有有限的擴(kuò)增能力。我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個(gè)增值困難的細(xì)胞類(lèi)型，你應(yīng)該密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞形態(tài)，因?yàn)樯倭炕祀s的細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞）可能隨著時(shí)間的推移，大量生長(zhǎng)從而成為主要細(xì)胞。