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技術文章 / article
胰酶的使用注意事項及配制方法
2022-06-21 瀏覽次數(shù)：4997
胰酶使用注意：
1、在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。
2、胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差。
胰酶配制方法：
1、培養(yǎng)液配制，方便好用，對細胞影響小，并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解
2、生理鹽水配制，要先調(diào)ph值7.2到7.4（①胰酶（1：250） 2.5 克②EDTA-Na 0.3克③NaCl 8.0克④KCl 0.4克⑤Glucose 1.0克⑥Phenol Red 0.005克⑦Water 1000 mL磁力攪拌2-3小時，調(diào)pH 7.8-8.0，過濾除菌。）
3、pbs（0.1%胰酶溶液的配制：稱取胰酶粉末0.1g，先用少許滅菌過的PBS調(diào)成糊狀，然后補足到100ml。置室溫攪拌4小時或冰箱內(nèi)過夜，過濾滅菌，分裝，4℃保存?zhèn)溆谩＃? 或是hanks或是D-hanks液配制（1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中，先用少許D-Hanks 平衡鹽溶液（pH7.2 左右）調(diào)成糊狀，然后再補足D-Hanks 平衡鹽溶液，攪拌混勻，置室溫4 小時或冰箱過夜，并不斷攪拌振蕩；2.次日，先用濾紙粗濾，再進行過濾除菌，分裝入瓶中，低溫冰箱保存?zhèn)溆茫Ｓ脻舛葹?.25% 或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH 至7.2 左右。）
一般0.45微米的一次性濾器過濾除菌，至于作用效果，需要消化一次細胞感覺一下，因為不同廠家的酶不一樣，有的作用溫和，有的作用劇烈。
4、是否需要四度放置過夜，取決于你的胰酶的純度。過去的胰酶純度不高，所以難以溶解，需要四度過夜. 而現(xiàn)在的胰酶純度都很高，就沒有必要四度過夜。從理論上來說，四度放置過夜，給細菌生長的機會，盡管過濾可以出去細菌，可是出不掉其代謝產(chǎn)物。
胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因，考慮有：
1、過期或是酶已經(jīng)部分變性
2、溶液ph值不對
3、在沒過濾之前的絮狀沉淀是正常現(xiàn)象，因胰酶多取自動物胰腺，沉淀為組織塊，過濾后即可。
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