培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)如何正確的使用胎牛血清

牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基，與合成的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配合使用，一般添加使用量在10~20%，主要作用是提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和生長(zhǎng)因子等。

養(yǎng)過(guò)細(xì)胞的小伙伴們應(yīng)該都知道：血清，由于其復(fù)雜的內(nèi)在成分和難以控制的外界因素，它既是細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)，也是細(xì)胞死亡的“致命du藥"，當(dāng)我們廢寢忘食的，嘔心瀝血的，鞠躬盡瘁的養(yǎng)著細(xì)胞同時(shí)，也極有可能因?yàn)橐粫r(shí)的疏忽和大意選擇了品質(zhì)不好的血清，導(dǎo)致珍貴的細(xì)胞意外身外，一切歸零，不得不重頭開(kāi)始!

血清質(zhì)量的差異性大

市場(chǎng)上各種血清產(chǎn)品魚(yú)龍混珠，一不小心，你可能就使用了品質(zhì)不好的血清。

血清按照采血時(shí)間可分為胎牛血清、新生牛血清和小牛血清，三者的優(yōu)劣順序?yàn)椋禾ヅＱ?gt;新生牛血清>小牛血清。

一般細(xì)胞建議使用胎牛血清培養(yǎng)，部分細(xì)胞可使用新生牛血清培養(yǎng)，小牛血清則不建議用于細(xì)胞培養(yǎng)。

血清在生產(chǎn)中受采血來(lái)源，條件和生產(chǎn)工藝等的影響，質(zhì)量差異較大，即使相同廠家不同批次的血清都會(huì)有差異;另外不同種類(lèi)的細(xì)胞對(duì)血清的適應(yīng)也有不同，這可能與血清中所含的生長(zhǎng)因子有關(guān)，所以血清在使用之前應(yīng)提前驗(yàn)證一下對(duì)所培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)的促進(jìn)作用。

血清的正確保存及使用指南

1）保存：胎牛血清一般在-20℃以下冷凍保存，使用之前應(yīng)先放到2~8℃冰箱過(guò)夜溶解，不建議直接放到室溫或37℃水浴溶解(升溫過(guò)快會(huì)導(dǎo)致血清中蛋白質(zhì)大量沉淀，影響血清質(zhì)量);若一次使用量不多，可溶解后分裝至小包裝凍存，避免反復(fù)凍融。血清解凍后在2~8℃保存時(shí)間一般不超過(guò)一個(gè)月。

2）滅活：一般血清使用時(shí)不需要滅活。滅活的作用是消除血清中的各種補(bǔ)體成分，但事實(shí)證明血清滅活之后會(huì)產(chǎn)生大量的沉淀，會(huì)對(duì)血清的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)造成較大破壞，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)不利。

3）沉淀：血清中的沉淀一般為析出的纖維蛋白，另外新生牛血清中各種蛋白含量明顯偏高，溶解時(shí)較易產(chǎn)生大量沉淀。血清中出現(xiàn)沉淀一般不會(huì)影響血清質(zhì)量，并且升溫至37℃時(shí)會(huì)溶解(不建議加熱血清);若沉淀量較多，可在400×g離心3min，取上清使用。血清和添加了血清的培養(yǎng)基在使用時(shí)不需要過(guò)濾。

血清使用中的一些問(wèn)題

1）如何更換使用血清？

需要更換使用不同品牌或批次的血清之前，需提前對(duì)要使用的血清進(jìn)行驗(yàn)證，可使用自己經(jīng)常培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行，保證該血清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的促進(jìn)作用。在更換使用時(shí)可以將要更換的血清和原本使用的血清1:1混合使用1~2代，待細(xì)胞*適應(yīng)后進(jìn)行更換。

2） 血清顏色的問(wèn)題

血清顏色主要是黃色或紅色，一般淡黃色或微紅色為正常。這個(gè)主要受血紅蛋白含量的影響，若顏色太深(接近培養(yǎng)基的顏色)，則有可能是采血過(guò)程中出現(xiàn)溶血導(dǎo)致的。

3）血清沉淀的問(wèn)題

血清中的沉淀主要是纖維蛋白凝集產(chǎn)生的，一般來(lái)說(shuō)每次凍融都會(huì)產(chǎn)生一部分的沉淀，但不影響血清質(zhì)量和使用。另外，血清在加入到培養(yǎng)基中后也是有可能會(huì)產(chǎn)生沉淀的，特別是滅活后的血清，會(huì)持續(xù)產(chǎn)生黑色顆粒，這可能會(huì)被錯(cuò)誤判斷為污染。一般血清產(chǎn)生的沉淀在顯微鏡下觀察為微小的不規(guī)則絮狀或者顆粒物質(zhì)，排查是否為污染好的辦法是用瓊脂板檢測(cè)。